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快速蛋白质液相色谱-凯发k8官方网站

发布时间:2021-09-27

  顾名思义,快速蛋白质液相色谱(fplc)是一种分离蛋白质分子的有效(快速)液相色谱技术。该术语还意味着流动相是液体;固定相通常是树脂。

  在该方法中,使用泵将流动相的流速保持在期望的速率。通过使用不同比例的构成洗脱液的流体来改变洗脱液的成分。保持分离条件,使得当洗脱液的组成改变时,样品组分的固定相将显示不同的吸附。该技术的优化导致样品中蛋白质和肽的分离。


  为什么要使用这项技术?

  高压液相色谱通常是分离小分子的首选。然而,生物分子的提取和纯化具有挑战性,原因如下:

  它们在生物体和人类生活的温度范围内工作。

  他们受不了高温。

  它们将在高效液相色谱中使用的有机溶剂环境中失去结构或功能(或两者都失去)。

  考虑到这些概念,pharmacia于1982年开发了快速蛋白质液相色谱技术,该技术提供了一种分离生物分子的方法。


  fplc的一些基本特征

  fplc的目标是纯化生物分子(生物聚合物、蛋白质、肽),其大小可能达数千道尔顿。样本体积可以从大约100毫升到几升不等。与生物分子一样,洗脱液也是一种缓冲液,通常由两种或两种以上的缓冲液组成。同样重要的是,所用的洗脱液成分具有生物相容性,不会与纯化物质(如特氟隆、钛和玻璃)发生反应。


  fplc的固定相通常是树脂。离子交换、凝胶过滤、反相和亲和色谱常用于fplc过程,每种模式都有多种树脂可供选择。有时,使用这些模式的组合。从粗提物中分离蛋白质的第一步通常是亲和层析。然后可以进行离子交换色谱来去除污染物。当不可能在两步中获得纯蛋白质时,也可以使用第三步如离子交换色谱来获得最终的纯产物。


  用作流动相的缓冲液和使用的树脂类型是一对。此外,如已经提到的,缓冲液本身可以是由运行缓冲液和洗脱缓冲液组成的组合缓冲液。当流动缓冲液流经色谱柱时,样品由样品泵施加。当样品流经色谱柱时,感兴趣的蛋白质被树脂选择性吸附。样品中的其他成分只是从系统中流出。然后在缓冲液混合阀的帮助下,通过引入洗脱缓冲液来改变缓冲液梯度。随着越来越多的洗脱缓冲液流入色谱柱,感兴趣的蛋白质从树脂上解离下来,随洗脱缓冲液流出。


  fplc的申请

  血浆、尿液和脑脊液等体液含有多种蛋白质和肽,fplc已被证明是研究这些体液中标记物的快速可靠的技术。例如,fplc可以获得脂蛋白谱。脑脊液中蛋白质的分析有助于检测疾病状态下体液成分的变化。由于fplc也可以研究多核苷酸,这项技术已被用于快速纯化核糖核酸和质粒脱氧核糖核酸。


  fplc蛋白分析也被用于纯化动物毒液和诊断-地中海贫血。它在识别单一蛋白质的微小变异方面的应用也被认为具有临床重要性。

  fplc已被广泛用于分析啤酒中的氮成分,这被认为在泡沫稳定性中起着重要作用。

  fplc的使用促进了人红细胞中卟啉原脱氨酶的纯化以及用于各种目的的抗体和疫苗的纯化。

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