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亲和色谱 -凯发k8官方网站

发布时间:2021-10-07

        亲和色谱是一种分离过程,用于纯化生化混合物中的一个分子或一组分子。它采用两个阶段;固定相和流动相,流动相中的特定分子将根据其特性与固定化结合,而通过溶液的其余部分不会受到影响。

该过程通常用于纯化生物分子,如酶、抗体和重组蛋白。它也可以通过同样的原理帮助去除病原体等有害物质。

例如,溶液中的蛋白质可以通过与另一个对蛋白质具有亲和力的分子(配体)连接的柱来纯化。当它们结合时,这将允许未反应的、未结合溶液通过柱。然后,通过改变缓冲液条件,从配体上洗脱目标分子,从而可以从表面去除蛋白质。

这一过程通常涉及与其同源伴侣相互作用的分子基团,如酶和底物、抗原和抗体,以及配体和受体。因此,纯化需要了解两组不同的分子如何相互作用。


静止相

对于固定相,科学家有许多选择:
多孔载体——使用的材料包括琼脂糖、纤维素、二氧化硅、聚甲基丙烯酸酯,可以获得不同的孔径。
无孔载体-与多孔载体相比,这些载体的表面积往往较低,尽管它们可以加快净化速度。
整体支撑-这些结合了大小流孔。
膜-这些可以用于更快的净化,但由于缺乏孔,它们的表面积减少了。
膨胀床吸附剂-这些是为了防止色谱柱堵塞而设计的。
灌注介质(流动珠)-这些孔有不同的大小。
载体的粒径非常重要。较小的分子可以导致较大的表面积,但污染物积累和难闻气味的可能性更大。较大的粒子可以解决这些困难,所以它们经常被用作替代品。

重要的是,所选的固定相不能吸引溶液中除纯化所需分子以外的任何分子。它需要化学性质稳定,不能与各种会通过它的溶液混合,如酶、洗涤剂和洗脱缓冲液。该结构本身需要坚固,以承受可能进行的许多纯化过程。


配体

结合待纯化物质的配体有不同的选择:
抗体——可以是单克隆的或多克隆的。它们的优点是高特异性和大的结合常数。
脱氧核糖核酸-这可用于聚合酶、脱氧核糖核酸结合蛋白、解旋酶和限制性内切酶。
氯代三嗪多磺化芳香族分子-这些分子用于裂解酶、水解酶、糖酵解酶、氧化还原酶等。
生物识别染料配体-这些可用于蛋白质纯化。
肽-这些用于生物分子。

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